人HE4測定試劑盒96T（酶聯(lián)免疫吸附法）
人HE4測定試劑盒96T（酶聯(lián)免疫吸附法）
人HE4測定試劑盒96T（酶聯(lián)免疫吸附法）
實(shí)驗(yàn)原理
HE4 EIA是一種非競爭性的夾心酶聯(lián)免疫方法。它通過兩種小鼠單克隆抗體，即2H5和3D8，直接針對于HE4結(jié)構(gòu)域中C-WFDC的兩個抗原決定簇位點(diǎn)。操作時將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品及患者標(biāo)本和生物素標(biāo)記的抗HE4鼠單克隆抗體（MAb）2H5滴加至鏈霉親和素包被的微孔板中一起溫育。在溫育過程中，標(biāo)準(zhǔn)品或患者標(biāo)本中存在的HE4抗原通過生物素標(biāo)記的抗HE4單克隆抗體（MAb）吸附到鏈霉親和素包被的微孔板上。隨后清洗微孔
板，加入HRP標(biāo)記的抗HE4單克隆抗體3D8進(jìn)行溫育反應(yīng)。經(jīng)過第二次清洗后，向每孔加入底物/顯色緩沖液（過氧化氫和3,3',5,5'四甲基聯(lián)苯胺）使其發(fā)生酶促反應(yīng)。在酶促反應(yīng)過程中如果抗原存在則會顯示為藍(lán)色。其顏色的深度與標(biāo)本中HE4的含量呈正比。微板孔中顏色的深度可用酶標(biāo)儀在620nm （也可選擇加入終止液后在405 nm ）進(jìn)行檢測。
每次試驗(yàn)后均需根據(jù)每個標(biāo)準(zhǔn)品的濃度與其相對應(yīng)的吸光度數(shù)值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，患者標(biāo)本中的HE4濃度即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出。
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